Hogyan működik az ELISA Kits
Jun 05, 2019
Dupla antitest szendvics módszer 1. Csomagolás: 0,05MPH9. a karbonátcsomagot puffereljük, hogy az antitestet 1-10 ug/ml fehérjetartalomra hígítsuk. Adjunk hozzá 0,1 ml-t, 4 °C-on egy éjszakán át mindegyik polisztirol lemez reakciónyílásaiba. Másnap dobja ki az oldatot a lyukba, és mossa le háromszor mosópufferrel, minden alkalommal 3 percig.
(röviden: mosás, ugyanez lent). 2. Minta hozzáadása: Adjon hozzá egy bizonyos hígítást a vizsgálandó mintából 0,1 ml-re a fent említett-csomagolt reakciónyílásba, inkubálja 1 órán át 37 °C-on. Ezután mossa le.
(Egyszerre készítsen üres lyukat, negatív kontroll lyukat és pozitív kontroll lyukat). 3. Adjon hozzá enzimmel- jelölt antitesteket: Minden reakciólyukba adjon egy frissen hígított enzim- jelölt antitestet (hígítás titrálás után) 0,1 ml-t.
Inkubálja 0,5-1 órán át 37 °C-on, és mossa le.
4. Adja hozzá a hordozófolyadék színes kijelzőjét: adjon hozzá ideiglenesen 0,1 ml TMB szubsztrát oldatot, 37 °C 10-30 percig minden reakciólyukba.
5. Reakció vége: Adjon minden reakciólyukhoz 2 M 0,05 ml kénsavat. 6. Az eredmények határozzák meg: lehet fehér alapon, szabad szemmel közvetlenül megfigyelni az eredményeket: minél sötétebb a szín a reakciólyukon belül, annál erősebb a pozitív fokozat, a negatív reakció színtelen vagy nagyon sekély, attól függően, hogy a szín a mélységben tükröződik,
Leolvasott páratlan érték: az ELISA teszteren 450 nm-en (ha BTS színvisszaadás, akkor 410 nm-en), a nulla benyelt üres kontrolllyukig, hogy megmérjük az egyes lyukak OD-értékét, ha nagyobb, mint a megadott negatív kontroll OD-érték 2,1-szerese, azaz pozitív.
Közvetett jog
1. Használja a pufferolandó csomagot, hogy az ismert antigént 1-10 mg/ml-re hígítsa lyukonként plusz 0,1 ml-re, 4 °C-on egy éjszakán át;
2. Másnap 3-szor mossa le;
3. Adjon hozzá egy bizonyos hígítású mintát (ismeretlen antitest) 0,1 ml-t a fent említett csomagolt reakciónyílásba, inkubálja 1 órán át 37 °C-on, mosson;
4. (mind vak, negatív és pozitív lyukkontroll) a reakciólyukba adjon hozzá 0,1 ml frissen hígított enzimjelölő második antitestet (anti-antitest);
5,37 °C inkubálás 35-60 perc, mosás;
6.'Utoljára DDW-vel mosott. A fennmaradó lépések megegyeznek a 4, 5, 6 „kettős antitest szendvics módszerével”.